مطالعه اثر ترکیبات سیستئامین و 2-مرکاپتواتانول بر بیان پروتئین نوترکیب single chain variable fragment (scfv) آنتی بادی ،بر علیه آنتی ژن cd22 در مخمر pichia pastoris

پایان نامه
چکیده

مقدمه: scfv یکی از معروفترین قطعات حاصل از آنتی بادیهای تک دودمانی است و مخمر pichia pastoris یکی از مهمترین میزبان های بیانی اینگونه قطعات محسوب می شود. روش های بسیاری برای افزایش میزان بیان پروتئین های هترولوگ در این میزبان وجود دارد .باتوجه به اینکه فرایند تغییرات پس از ترجمه ای در شبکه آندوپلاسمی مرحله تعیین کننده سرعت در تولید پروتئین هاست، هدف قرار دادن چاپرون هایی نظیر pdi (protein disulfide isomerase)یکی از مهمترین استراتژی های افزایش بیان محسوب می شود. در این مطالعه اثر ترکیبات القا کننده بیان pdi نظیر سیستئامین و2-مرکاپتواتانول در افزایش میزان بیان، مورد ارزیابی قرار می گیرد . هدف: بررسی اثر سیستئامین و 2-مرکاپتواتانول بر میزان بیان پروتئین نوترکیب scfv روشها: سویه مورد نظر در برابرعوامل احیا کننده با غلظت های مختلف و فواصل زمانی مختلف رشد داده شد.میزان بیان با روش sds-page و وسترن بلاتینگ و الایزا ودیگر روش های مولکولی بررسی شد. نتایج:mic (minimum inhibitory consentration) برای ترکیبات سیستئامین و2-مرکاپتواتانول تعیین شد نتایج mic نشان داد که ازغلظت 6.25 میلی مولار برای سیستئامین و غلظت 1.5میلی مولار برای 2-مرکاپتواتانول برای بهینه کردن شرایط کشت می توان استفاده کرد و سویه های ترانسفورم شده با سازه بیان کننده scfv در حضور غلظت های مناسب از این دو ترکیب رشد داده شد. میزان بیان در حضور سیستئامین افزایش معنی داری نشان داد اما 2-مرکاپتواتانول منجر به کاهش میزان بیان گردید. نتیجهگیری: در این تحقیق سیستئامین در غلظتهای sublethal توانست میزان بیان scfvعلیه آنتی ژن cd22را افزایش دهد. به نظر می رسد این اثر افزایشی ناشی از القا بیان چپرونها ئی نظیر pdi باشد. این در حالیست که -me 2چنین افزایشی را موجب نگردید.

منابع مشابه

Construction of recombinant Pichia pastoris expressing single-chain antibody fragment against extracellular domain of EpCAM

Introduction: Epithelial cell adhesion molecule (EpCAM) is highly expressed on epithelial tumors. So, EpCAM is a valuable antigen for targeted therapy. Using monoclonal antibodies (mabs) is an attractive approach for targeted cancer therapy. Importantly, limitations of intact mabs including large size led to the development of antibody fragments such as single chain fragment variable (scfv). Pi...

متن کامل

Efficient production of single-chain fragment variable-based N-terminal trimerbodies in Pichia pastoris

BACKGROUND Recombinant antibodies are highly successful in many different pathological conditions and currently enjoy overwhelming recognition of their potential. There are a wide variety of protein expression systems available, but almost all therapeutic antibodies are produced in mammalian cell lines, which mimic human glycosylation. The production of clinical-grade antibodies in mammalian ce...

متن کامل

بیان آنتی بادی زنجیره سنگین شتری(نانوبادی)علیه نوروتوکسین بوتولینوم تیپ e در pichia pastoris

چکیده مخمر پیکیا پاستوریس یک میزبان برجسته برای تولید پروتئین های نوترکیب است و در مقایسه با دیگر سیستم های بیانی مزایای فراوانی دارد. از جمله اینکه این سیستم به عنوان یک یوکاریوت، قادر است تعداد زیادی از تغییرات پس از ترجمه همچون پردازش پروتئولتیک، فولدینگ صحیح، تشکیل پیوند های دی سولفیدی و گلیکوزیلاسیون پروتئین ها را انجام دهد. همچنین قادر به استفاده از متانول به عنوان تنها منبع کربن در غیاب...

15 صفحه اول

جداسازی و بررسی خصوصیات مولکول هایscFv ضد HER2 با استفاده از تکنولوژی نمایش فاژی جهت تشخیص سرطان پستان

مقدمه: scFv ها، فرم هایی از آنتی بادی های نوترکیب می باشند که با استفاده از روش های پیشرفته بیولوژی مولکولی و مهندسی ژنتیک ساخته می شوند. همچنین آنتی ژن HER2 هدف مناسبی برای طیف گسترده ای از سرطان ها می باشد. مطالعه حاضر با هدف جداسازی scFv آنتی بادی های اختصاصی انجام شد. روش‌کار: به منظور جداسازی قطعات scFv های اختصاصی علیه قسمت خارج سلولی HER2 کوت شده در ایمونوتیوب، تکنولوژی نمایش فاژی با است...

متن کامل

استفاده ازتکنولوژی پروتئین نوترکیب برای تهیه آنتی بادی اختصاصی علیه ناقل بیماری رایزومونیا در چغندرقند

بیماری ریشه‌گنایی )رایزومانیا ( از مهمترین بیماری‌های ویروسی چغندر¬قند می‌باشد. عـامـل این بیماری ویروس رگبرگ زرد نکروتیک چغندر قند می¬باشد. قارچ Polymyxa betae به عنوان تنها ناقل طبیعی این ویروس شناخته شده است. با توجه به ماهیت پارازیت اجباری ناقل و عدم قابلیت کشت در آزمایشگاه، شناسایی گیاهان آلوده معمولا بر اساس مشاهده میکروسکوپی انجام می¬شود. در این تحقیق به منظور تسهیل در روند شناسایی، آنتی...

متن کامل

منابع من

با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید

ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده

{@ msg_add @}


نوع سند: پایان نامه

دانشگاه آزاد اسلامی - دانشگاه آزاد اسلامی واحد علوم دارویی - دانشکده زیست شناسی

میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com

copyright © 2015-2023